标题: | 正交设计在梨基因组RAPD优化体系中的应用 |
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基金项目: | 四川省教育厅重点科技项目(2004A135); |
关键词: | 梨; RAPD; 基因组DNA; 正交设计; 优化; |
摘要: | 采用正交设计研究方法,建立了梨RAPD分析的PCR反应体系,成功地进行了RAPD扩增,筛选出梨RAPD的最佳方案为:25μl反应体系中包括引物0.5μmol.μL-1,dNTPs0.1mmol.L-1,模板DNA10ng,Taq酶1U,Mg2+4mmol.L-1,10buffer缓冲液2.5lμ,其余部分用无菌超纯水补平。PCR扩增循环为95℃3min,38℃1min,72℃2min1次循环;94℃1min,38℃1min,72℃2min,46次循环,最后72℃延伸10min。 |
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